特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 中華根瘤菌通用探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱 | Sinorhizobium spp. | 貨號(hào) | YSP97198 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 胞裂蛋白11(SEPT11)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 大腸埃希菌 25g 胞裂蛋白13(SEPT13)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 黑附球菌 5g 胞裂蛋白14(SEPT14)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 棒桿菌屬 25g 胞裂蛋白2(SEPT2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 球黑孢菌 5g Sestrin 3蛋白(SESN3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 長(zhǎng)枝木霉 25g Sestrin 1蛋白(SESN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 水生拉恩氏菌 5g 互生蛋白β2(SNTβ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 大腸埃希氏菌 1g 互生蛋白γ1(SNTγ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 阿爾通山堿線菌 5g 互生蛋白γ2(SNTγ2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 克魯斯假絲酵母 100g 互生蛋白α1(SNTα1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 阿魏側(cè)耳 25g 肌長(zhǎng)蛋白(SSPN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 慢生根瘤菌 5g Desmuslin蛋白(DMN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 85% 鏈霉菌 1mg 伴肌動(dòng)蛋白(NEB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥99% 強(qiáng)雄腐霉 5MG 連續(xù)蛋白(E)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 假蜜環(huán)菌 25g Fukutin蛋白(FKTN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 血紅鞘鞍醇單胞菌 5g 紡錘體蛋白2(SPIN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 96% 黑曲霉 1g 穩(wěn)定素2(STAB2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 乳粉 三聚胺 100g 突觸融合蛋白4(STX4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 根瘤菌 25g 中華根瘤菌通用探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒酸化粘著斑激酶抗體midnolin isoform Proin 1 中腦核仁蛋白1(抗原)100 ul 絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體midnolin isoform Proin 2 中腦核仁蛋白2(抗原)20 ul 肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體(C端)MICA(MHC class I polypeptide-relad sequence A) 一種細(xì)胞應(yīng)激分子抗原100 ul 凝血因子13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子)MRP3(Multidrug Resistanec-Associad Proin 3) 多藥耐藥相關(guān)蛋白3(抗原)100 ul 濾泡樹(shù)突細(xì)胞分泌蛋白抗體MRP1(Multidrug Resistanec-Associad Proin 1) 多藥耐藥相關(guān)蛋白1(抗原)100 ul 纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子13抗體LRP/MVP (Lung resistance relad proin) 肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原)100 ul 骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體MSLN(mesothelin) 間皮素(多肽抗原)100 ul 口蹄疫病毒A型抗體(N端)MSH2 (mutS homolog 2) MSH2抗原100 ul 腎刷狀緣抗體NKR(Neuromedin B Receptor) 神經(jīng)激肽B受體(抗原)100 ul |