幾種培養(yǎng)基配方
葡葡糖銨培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類和糖溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜面.
試驗(yàn)方法:用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面,在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液,肉眼觀察不見(jiàn)混濁,以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜.將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種,同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對(duì)照.于36±1℃培養(yǎng)24h.陽(yáng)性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長(zhǎng);陰性者不生長(zhǎng),但在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好.如在葡萄糖銨斜面生長(zhǎng)極微小的菌落可視為陰性結(jié)果.
注:容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水沖洗干凈,并用新棉花做成棉塞,干熱滅菌后使用.如果操作時(shí)不注意,有雜質(zhì)污染時(shí),易造成假陽(yáng)性的結(jié)果.
Hugh-Leifson培養(yǎng)基（O/F試驗(yàn)用）
成分:
蛋白胨 2g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 0.3g
瓊脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:將蛋白胨和鹽類加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,瓊脂煮沸,溶化瓊脂,然后加入指示劑.混勻后,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,直立凝固備用.
試驗(yàn)方法:從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種,同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面,高度約1cm,于36±1℃培養(yǎng).
馬尿酸鈉培養(yǎng)基
成分:
馬尿酸鈉 1g
肉浸液 100mL
制法:將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi),分裝于小試管內(nèi),并于管壁畫(huà)一橫線.以標(biāo)志管內(nèi)液面高度,高壓滅菌121℃20min.
試劑:三氯化鐵（FeCl3·6H2O）12g,溶于2%鹽酸溶液100mL中即成.
試驗(yàn)方法:用純培養(yǎng)物接種,于42℃培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)液是否到達(dá)試管壁上記號(hào)處,如不足時(shí),用蒸餾水補(bǔ)足至原量.經(jīng)離心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化鐵試劑0.2mL,立即混合均勻,經(jīng)10～15min,觀察結(jié)果.
結(jié)果:出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽(yáng)性.
營(yíng)養(yǎng)明膠
成分:
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
pH6.8～7.0
制法:加熱溶解,校正至pH7.4～7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固.復(fù)查zui終pH應(yīng)為6.8～7.0.
試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在22～25℃培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時(shí)間.或放在36士1℃培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果.
苯丙氨酸培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 3g
DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g） 2g
磷酸氫二鈉 1g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面.
試驗(yàn)方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36±1℃培養(yǎng)4h或18～24h.滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色.
氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000mL
1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mL
L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
制法:除氨基酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL,分別加入各種氨基酸:賴氨酸,精氨酸和鳥(niǎo)氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸.分裝于滅菌的小試管內(nèi),每管0.5mL,上面滴加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min.
試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)18～24h,觀察結(jié)果.氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿,培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色.陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色.對(duì)照管應(yīng)為黃色.
蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗(yàn)用）
成分:
蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min.
靛基質(zhì)試劑
柯凡克試劑:將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后緩慢加入濃鹽酸25mL.
歐-波試劑:將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi).然后緩慢加入濃鹽酸20mL.
試驗(yàn)方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)1～2d,必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d.加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色.
注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸.每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用.
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