在繼續(xù)探討MKN-45細胞，這一人低分化胃癌細胞系的操作步驟時，我們不得不強調(diào)其培養(yǎng)環(huán)境的精細調(diào)控對于細胞生長與實驗結(jié)果的至關(guān)重要性。首先，確保培養(yǎng)基的配方精確無誤，通常MKN-45細胞使用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，這有助于提供細胞生長所需的營養(yǎng)成分和生長因子。
接下來，細胞的傳代操作需謹慎進行。在無菌條件下，移除舊培養(yǎng)基，用預(yù)溫的PBS輕輕洗滌細胞一至兩次，以去除殘留的培養(yǎng)基和死細胞。隨后，加入適量含EDTA的進行消化，消化時間需根據(jù)細胞貼壁情況靈活調(diào)整，避免過度消化導(dǎo)致細胞損傷。待細胞邊緣開始變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶使細胞脫落，加入適量新鮮培養(yǎng)基終止消化，并通過移液管輕柔吹打形成單細胞懸液。
在細胞計數(shù)后，按照適當(dāng)?shù)谋壤龑⒓毎麘乙航臃N到新的培養(yǎng)瓶中，注意控制細胞密度，避免過密導(dǎo)致生長抑制或過疏影響細胞間的相互作用。接種后，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使細胞均勻分布，并置于37°C、含5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
此外，對于MKN-45細胞系的長期保存，可采用液氮凍存法。在細胞生長狀態(tài)良好時，進行凍存前處理，包括消化、離心收集細胞，并使用含有DMSO的凍存液重懸細胞。隨后，將細胞懸液分裝至凍存管中，按照梯度降溫的方式逐步放入4°C、-20°C、-80°C冰箱，最終轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。
通過上述細致的操作步驟，我們可以有效維持MKN-45細胞的活性與穩(wěn)定性，為后續(xù)的科學(xué)研究提供可靠的實驗材料。
